坐骨神经——腓肠肌标本制备

        试验目的：

学习并掌握蛙类坐骨神经-腓肠肌标本的制备。利用此标本做神经肌肉的一些实验。

试验原理：

蛙类的一些基本生命活动和生理功能与温血动物近似，而其离体组织器官的生活条件较为简单，可以在事温条件下，于一定时间内保持其功能。因此在生理实验中常用蛙类的坐骨神经-腓肠肌标本来观察兴奋性、兴奋过程的一些规律及骨肌的收缩特性。

试验动物：蛙或蟾蜍。

试验器材：蛙类手术器械一套，如蛙板、玻璃板、粗剪刀、手术剪、镊子、探针、玻璃分针、大头针、解剖盘、滴管、任氏液、培养皿、锌铜弓、烧杯、棉线。

试验步骤：

1. 破坏脑脊髓  破坏脑脊髓的方法有两种。一为去头毁脊髓，即取蛙或蟾蜍1只，用左手紧握其身及肢体，右手执粗剪刀从口裂插入口腔，沿两眼后连线剪去头，然后用探针插入椎管，捣毁脊髓。另一方法事用探针毁脑毁脊髓，方法为左手握蛙，用食指压蛙头前端，拇指按压背部，使头前俯，右手持探针，由两眼之间沿中线向后方滑动，触及耳后线之间的凹陷处即是枕骨大空的位置，随即将探针由此垂直刺入皮肤，再将针折向前方插入颅腔并左右搅动捣毁脑组织。然后将针退出至刺入点皮下，针尖折向后方，捅入椎管捣毁脊髓。待四肢松软，即表明脊髓完全破坏。

2. 去内脏及剥皮  用粗剪刀在蛙前肢后部将脊髓柱横断，并将头及前肢连同所有内脏剪去。用左手捏住脊柱断端，右手从断面往下剥去皮肤至趾端，然后将标本放入盛由任氏液的培养皿中备用。洗净手及用过的器械，再进行以下操作。

3. 游离坐骨神经  将剥去皮的标本腹面向上放在清洁的玻璃板上，用粗剪刀沿正中线在耻骨联合处剪开，使蛙的两腿完全分离，保留与坐骨神经相连的脊椎骨。用一条蛙腿背面向上放在玻璃板上，用玻璃分针在股二头肌及半膜肌之间找出坐骨神经的大腿部分，小心地将其从脊椎骨到国窝全部分离出来，保留一小段与坐骨神经相连的脊椎骨，其余部分全部剪去。

4. 分离腓肠肌  用玻璃分针将腓肠肌跟腱分离并结扎，在结扎处的下端剪断跟腱，左手执线提起腓肠肌分离至膝关节。

5.制成坐骨神经 – 腓肠肌标本  在膝关节周围剪断全部大腿肌肉，并用粗剪刀将股骨刮干净，在股骨上部将其剪断。再在膝关节以下将小腿剪去，留下的即为坐骨神经 – 腓肠肌标本。

6.  用锌铜弓检查标本  用经任氏液粘湿的锌铜弓迅速接触标本的坐骨神经。如腓肠肌发生明显的收缩，表示兴奋性良好，即可放入盛有任氏液的培养皿中备用。

注意事项：

 1. 破坏脑脊髓前可用纱布挤捏蟾蜍头部两侧大的耳后腺，使其排除分泌物，避免蟾酥溅入眼内。

2. 要用玻璃分针分离神经，尽量减少神经与金属器械及污物接触。防止神经过度牵拉和压迫。

3. 为便于固定标本，股骨的保留长度约1cm左右为宜。

4. 要经常用任氏液润湿及请洗标本，防止干燥，勿用清水冲洗。

5. 提取标本时，手提跟腱结扎线或用镊子夹住股骨断端，不要直接夹住牵拉标本。